根據《機動車駕駛證申領和使用規定》，以下情形不得申請大型客車：
交通事故責任方面：發生交通事故造成人員死亡，承擔同等以上責任的。
酒駕方面
醉酒后駕駛機動車的。
再次飲酒后駕駛機動車的。
涉毒方面：有吸食、注射毒品后駕駛機動車行為的，或者有執行社區戒毒、強制隔離戒毒、社區康復措施記錄的。
危險駕駛犯罪方面：駕駛機動車追逐競駛、超員、超速、違反危險化學品安全管理規定運輸危險化學品構成犯罪的。
駕駛證吊銷或撤銷方面：被吊銷或者撤銷機動車駕駛證未滿十年的。
無證駕駛事故方面：未取得機動車駕駛證駕駛機動車，發生負同等以上責任交通事故造成人員重傷或者死亡的。
此外，若有器質性心臟病、癲癇病、美尼爾氏癥等妨礙安全駕駛疾病的，也不得申請機動車駕駛證，自然也不能申請大型客車駕駛證。